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    1. 上海遠慕生物科技有限公司

      遠慕分享生物實驗中常用電泳方法
      點擊次數:10 發布時間:2022-07-27

       一、紙電泳 

      指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區帶電泳。

      將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進行電泳。

      二、醋酸纖維素薄膜電泳

      電泳時經過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。

      三、凝膠電泳

      由區帶電泳中派生出的一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式。

      凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯/酰胺凝膠電泳是普通電泳中應用最多的兩種形式。

      目前,這種辦法被廣泛用來分析蛋白質和核酸。

      四、等電聚焦電泳

      1.等電聚焦電泳過程  

      一種利用有pH值梯度的介質,分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。

      在一個穩定連續的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質)中進行分離,每一種被分離的兩性物質都移向與它的等電點相一致的pH位置,在那里不再移動(稱為聚焦)。

      2.等電聚焦電泳的特點

      ①使用兩性載體電解質,在電極之間形成穩定、連續、線性的pH梯度;

      ②由于“聚焦效應",即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區帶界面;

      ③電泳速度快;④分辨率高;

      ⑤加入樣品的位置可任意選擇;

      ⑥可用于測定蛋白質類物質的等電點;

      ⑦適用于中、大分子量(如蛋白質、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。

      五、等速電泳

      采用兩種不同濃度的電解質,一種為前導電解質,充滿整個毛細管柱;另一種為尾隨電解質,置于一端的電泳槽中。前導電解質的遷移率高于任何樣品組分,尾隨電解質則低于任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強電場的作用下,各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中移動,實現分離。

      六、雙向凝膠電泳(二維電泳)

      第一向采用等電聚焦 根據復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的PI的不同,將蛋白質進行分離。

      第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯/酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)就是按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶狀,而是呈現為斑點狀。

      七、免疫電泳

      免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開;然后加入抗體做雙相免疫擴散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇,在二者比例適當的地方,形成肉眼可見的沉淀弧。

       

       

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