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    1. 上海遠慕生物科技有限公司

      遠慕實驗:電泳跑膠SDS-PAGE的定義
      點擊次數:27 發布時間:2022-07-25

       聚丙烯酰胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應,它有兩種形式,一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠,蛋白質在電泳中保持完整的狀態,蛋白在其中依三種因素分開:蛋白大小,形狀和電荷。

      而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個技術首先是1967年由shapiro建立,他們發現在樣品介質和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑后,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小,電荷因素可以忽視。

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      SDS是陰離子去污劑,作為變性劑和助溶試劑,它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白分子的二。三級結構。而強還原劑如巰基乙醇,二硫蘇糖醇能使絆胱/氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后,分子被解聚成多肽鏈,解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束,所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的蛋白量,這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。

      SDS-PAGE一般采用的是不連續緩沖系統,于連續緩沖系統相比,能夠有較高的分辨率。

      濃縮膠的作用是有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區帶。當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩沖液,電極液選TRIS甘氨/酸。電泳開始后,HCL解離成氯離子,甘氨/酸解離出少量的甘氨/酸根離子。蛋白質帶負電荷,因此一起向正極移動,其中氯離子最快,甘/氨酸根離子最慢,蛋白居中。電泳開始時氯離子泳動率最大,超過蛋白,因此在后面形成低電導區,而電場強度與低電導區成反比,因而產生較高的電場強度,使蛋白和甘/氨酸根離子迅速移動,形成以穩定的界面,使蛋白聚集在移動界面附近,濃縮成一中間層。

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