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      ELISA試驗中的溫育有哪些講究?
      點擊次數:24 發布時間:2022-07-21

       

       

        什么是溫育?

        在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反響的完結需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。

        溫育時刻的考究:

        ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時機,只需最靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐漸平衡的進程,因而需經擴散才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。

        ELISA試劑盒溫育溫度的考究:

        溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學研討時,試驗標明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達頂/峰。為加速反響,可進步反響的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為完全,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜,以構成最多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA中一般不予選用。

        溫育保溫的考究:

        保溫的方法除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,最終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度,特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應嚴厲約束在規則的范圍內,規范室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據說明書的要求操控溫育。室溫溫育時,ELISA板只需平置于操作臺上即可。

       

       

       

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