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      如何查看抗體是磷酸化還是非磷酸化
      點擊次數:30 發布時間:2022-07-28

       什么是磷酸化

      磷酸化是將磷酸基團加在中間代謝產物上或加在蛋白質(protein)上的過程。其中除去磷酸基團的酶稱為磷酸酶。 蛋白質磷酸化可發生在許多種類的氨基酸(蛋白質的主要單位)上,其中以絲氨/酸為多,接著是蘇氨/酸
      。

      除了蛋白質以外,部分核苷酸,如三磷酸腺苷(ATP)或三磷酸鳥苷(GTP)的形成,也是經由二磷酸腺苷和二磷酸鳥苷的磷酸化而來,此過程稱為氧化磷酸化。另外在許多糖類的生化反應中(如糖解作用),也有一些步驟存在氧化磷酸化作用。

      信號傳導中的作用:

      (1)細胞內的信號蛋白主要分為兩大類:一類在蛋白激酶的作用下磷酸化,共價結合ATP所提供的磷酸基團;另一類則在信號作用下結合GTP,通常以GTP取代GDP。

      (2)這兩種胞內信號蛋白的共同特征是,在信號達到時通過獲得一個或幾個磷酸基團而被激活,而在信號減弱時能去除這些基團,從而失去活性。在信號中繼網中,某個信號蛋白磷酸化通常造成下游的蛋白依次發生磷酸化,形成磷酸化級聯反應。

      (3)蛋白質的磷酸化主要集中在肽鏈中的酪氨/酸、絲氨/酸、蘇氨/酸殘基上,這些殘基上具有游離的羥基,且本身不帶電荷,當磷酸化作用后,蛋白質便具有了電荷,從而使結構發生變化,進一步引起蛋白質活性的變化,這也是蛋白質磷酸化的意義所在。

      QQ圖片20220616151240.jpg

      磷酸化和非磷酸化的抗體主要區別有:

      1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態(磷酸化)的蛋白。

      2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點設計,是一種位點特異性的多抗,這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成(多抗):原核表達蛋白->純化->免疫動物->收獲抗體。

      4.磷酸化抗體合成:人工合成含磷酸化位點的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動物->收獲抗體。

      5.磷酸化的蛋白很大部分是轉錄相關因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體。檢測同一個蛋白,原位檢測可能具有不同的細胞定位。轉錄因子磷酸化后由細胞質進入細胞核。

      6.一般而言,磷酸化蛋白的實驗結果與分子功能更直接相關。

      非磷酸化抗體是測該蛋白的含量,不能知道其活性狀態,磷酸化抗體是測該蛋白的磷酸化水平如何,側重于了解該蛋白的一種活性狀態。

      磷酸化抗體主要是針對磷酸化位點制備的,檢測該蛋白在細胞受到刺激時該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強還是減弱)。

      非磷酸化抗體(主要針對非磷酸化位點的肽段制備的)主要檢測組織或細胞中該蛋白的表達情況,組織分布或細胞中定位,同時可以作為磷酸化水平變化的內參等.

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