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    1. 上海遠慕生物科技有限公司

      Western Blot實驗試劑的準備工作
      點擊次數:47 發布時間:2022-07-20

       

       

        1. 30%儲備膠溶液: 丙烯酰胺(Acr) 29.0g

        亞甲雙丙烯酰胺(Bis) 1.0g

        混勻后ddH2O,37℃溶解,定容至100ml,棕色瓶存于室溫。

        2. 4×分離膠緩沖液(1mol/L Tris-HCl PH 8.8) Tris 18.17g加ddH2O溶解,濃鹽酸調PH 8.8,定容至100ml。

        3. 4×濃縮膠緩沖液(0.5mol/L Tris-HCl PH 6. 8) Tris 12.1g加ddH2O溶解,濃鹽酸調PH 6. 8,定容至100ml。

        4. 10%SDS:電泳級SDS 10.0g加ddH2O,68℃助溶,濃鹽酸調PH 7.2,定容至100ml。

        5. 5×電泳緩沖液(PH 8.3): Tris 15.2g

        甘氨/酸 94g

        ddH2O 定容到1000ml

        SDS 5g

        先在974ml蒸餾水中加入Tris堿,待溶解完全后,再加甘氨/酸,最后加SDS。

        6. 10%過硫酸銨(AP):0.1g AP加ddH2O至1.0ml,4℃保存,要在一周內使用,最好新鮮配制。

        7. 2×加樣緩沖液:2×SDS加樣緩沖液

        0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8) 2ml

        10%SDS 4 ml

        β-巰基乙醇 1ml

        甘油 2ml

        1%溴芬藍 1ml

        置4℃避光保存

        8. TEMED:注意室溫較低時TEMED量可加倍,最后灌膠之前再用

        9. 轉膜緩沖液(Towbin transfer Buffer): 即1×SDS-PAGE

        10. 0.0 1mol/L PBS (PH 7.4) : NaCl 8.5g

        (12H2O)Na2HPO4 2.9011g

        (2H2O)NH2PO4 0.24g

        加ddH2O定容至 1000ml

        11. 封閉液: 1×PBS中加入 30ml

        5%(V/V)脫脂奶粉 1.5g

        0.02%疊氮鈉 0.006g

        0.05%Tween-20 0.015g

        12. 漂洗液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS溶液

        每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20

        13. 水飽和正丁醇: 正丁醇 50 ml

        ddH2O 5 ml 加入瓶中震蕩,使結合,存于室溫。

        用時取上面一相加在凝膠上面。

        14. 考馬斯亮藍染色法試劑:一般用G250考馬斯亮藍(蛋白定量專用)

        染色液: 90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250馬斯亮藍0.25g,用Whatman 1號濾紙過濾染液以去除顆粒狀物質。(染色液多次回收利用)

        脫色液:90 ml甲醇:水(1:1,V/V)和10 ml冰乙酸的混合液

        15. 麗春紅S染色色法試劑:2%乙酸,

        0.5%麗春紅的水溶液

        脫色液:TBS

        16. Aprotinin:為一58氨基堿性多肽,經反復凍融后,會發生集聚,儲存液應分裝成小份,保存于-20度,每一小份用后應予廢棄。

        17. PMSF:在溶液中不穩定,應在臨用前從儲存液中現加于裂解液中。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量的水沖洗。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。PMSF通常配成10mmol/L濃度儲液(1.74或17.4mg/ml溶于異丙醇中)保存于-20度。

        18. 顯色液:聯苯胺顯色液(DAB)

        DAB 2ml

        10%H2O2 60μl

        PBS(0.1mol/L PH6.4) 10ml

        19. 三去污裂解緩沖液

        0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0) 0.785g/100ml

        0.15mol/L NaCl 0.8775 g/100ml

        0.02%疊氮鈉 0.02 g/100ml

        0.1%SDS 0.1 g/100ml

       

       

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